一、ELISA为什么不能检测膜蛋白
ELISA的反应都是在缓冲液中反应,说白了就是在水中反应.而膜蛋白的溶解性很差.或者基本不溶解.只有在一些特定的试剂(如强的盐离子,有机试剂)中才能溶解.而这些特定的试剂对抗原抗体的反应又有很大的影响.所以目前基本是无法用ELISA来检测膜蛋白的.就算是勉强检测(不考虑假试剂盒的问题).有可能误差太大.
二、“SOS”是什么意思?
国际求救信号:SOS
Save Our Souls(救救我们)
三、westen blot组织膜蛋白怎么提取
加上标签做融合蛋白,pull-down。western blot一般看相互作用和表达,不用于纯化蛋白。
四、细胞膜的结构和生理特征是什么?
细胞膜的基本结构:(1)脂双层:磷脂、胆固醇、糖脂,每个动物细胞质膜上约有109个脂分子,即每平方微米的质膜上约有5x106个脂分子。(2)膜蛋白,分内在蛋白和外在蛋白两种。内在蛋白以疏水的部分直接与磷脂的疏水部分共价结合,两端带有极性,贯穿膜的内外;外在蛋白以非共价键结合在固有蛋白的外端上,或结合在磷脂分子的亲水头上。如载体、特异受体、酶、表面抗原。(3)膜糖和糖衣:糖蛋白、糖脂
细胞膜功能
(1)分隔形成细胞和细胞器,为细胞的生命活动提供相对稳定的内环境,膜的面积大大增加,提高了发生在膜上的生物功能;
(2)屏障作用,膜两侧的水溶性物质不能自由通过;
(3)选择性物质运输,伴随着能量的传递;
(4)生物功能:激素作用、酶促反应、细胞识别、电子传递等。
(5)物质转运功能:细胞与周围环境之间的物质交换,是通过细胞膜的砖运动功能实现的,其主要转运方式有以下四种。
1)单纯扩散:脂溶性物质有膜的高浓度侧向低浓度侧的扩散过程,称为单纯扩散。
2)易化扩散:非脂溶性物质在膜蛋白的帮助下,顺浓度查获电位差跨膜扩散的过程,成为易化扩散。易化扩散的三个特点:1、特异性:记忆中离子通道或载体一般指转运一种物质。2、饱和性:即当背后钻云物质增加到一定限度时,转运量不再随之增加,这是由于离子通道或载体的数量有限的缘故。3、竞争性抑制:记忆中离子通道或载体同时转运两种或两种以上物质时,一种物质浓度增加,将削弱对另一种物质的转运。
单纯扩散和易化扩散都是顺浓度查进行的,细胞本身不消耗能量,均属于被动转运。
3)主动转运:离子或小分子物质在膜上“泵”的作用下,被逆浓度差或逆电位差的跨膜转运过程,称为主动转运。
4)入胞和出胞作用:是转运大分子或团块物质的有效方式。物质通过细胞膜的运动从细胞外进入细胞内的过程,称入胞。包括吞噬和吞饮。液态物质入胞为吞饮,如小肠上皮对营养物质的吸收;固体物质入胞为吞噬,如粒细胞吞噬细菌的过程。除宝石之物质通过细胞膜的运动从细胞内派到细胞外的过程。细胞的代谢产物及腺细胞的分泌物都是以出胞作用完成的。
(6)细胞膜的受体功能:受体是细胞识别和结核化学信息的特殊结构,其本质是蛋白质。
五、免疫细胞的问题
病毒为求得生存而形成了对宿主免疫监视的逃避机制,它可以在多个层次对宿主的免疫机能进行干扰和破坏。病毒对宿主免疫监视的逃避集中体现在对T细胞抗原识别的干扰、对自然杀伤(NK)细胞杀伤作用和细胞凋亡的抑制,以及对介导免疫细胞因子的调节等。
六、如何检测外周血中表达在特定细胞上一种膜蛋白的阳性比例 细胞流式技术
这是流式细胞仪最常用的方法之一,首先,你需要能分辨这种“特定细胞”,不管是通过FSC/SSC,还是通过荧光标记。总之,这种特定细胞必须有一个细胞群可以被gate出来。然后,你需要可以识别膜蛋白的荧光抗体来染色。在前面选中的gate的基础上,再看该抗体染色的阳性率